骆驼凝乳酶原基因在乳酸克鲁维酵母中的重组表

浏览:    时间:2020-08-14 16:46

摘要:凝乳酶(EC 3.4.23.4)是一种从未断奶的小牛皱胃中发现的天门冬氨酸蛋白酶, 它可以专一地切割乳中-酪蛋白的 Phe 105 -Met 106 之间的肽键,破坏乳中的酪蛋白胶束而引起蛋白质凝聚,因此

凝乳酶(EC 3.4.23.4)是一种从未断奶的小牛皱胃中发现的天门冬氨酸蛋白酶, 它可以专一地切割乳中κ-酪蛋白的 Phe 105 -Met 106 之间的肽键,破坏乳中的酪蛋白胶束而引起蛋白质凝聚,因此在乳制品尤其是在干酪加工制作中应用广泛。近年来国内外干酪市场发展迅猛,年平均增长率达到 3.5%,干酪生产的高增长率使凝乳酶的需求量大大增加。 目前世界上凝乳酶的年需求量约 25×106 L ,约占全世界酶制剂总量的15%,已成为第二大酶制剂。(驼可汗招商加盟)

目前市场上销售的商品凝乳酶制剂主要是牛凝乳酶,约占市场上商品凝乳酶制剂总量的70%。尽管牛凝乳酶是干酪生产中使用广泛的凝乳酶, 但其凝乳活性与蛋白酶水解活性的比值相对较低,尤其是它对骆驼乳无凝乳活性,这些缺陷无疑限制了牛凝乳酶在干酪加工制作中的应用。 骆驼凝乳酶在骆驼胃粘膜细胞中以骆驼凝乳酶原前体(camel preprochymosin ,cPPC)形式合成,含有 16 个氨基酸疏水性信号肽序列,分泌到细胞外时形成骆驼凝乳酶原(camel prochymosin ,cPC,365 AA ,分子质量 40.7 ku )。(驼可汗招商加盟)

在酸性条件下,cPC N末端的42个氨基酸能够自我剪切掉,形成分子质量为 35.6 ku ( 323 个氨基酸),有活性的成熟凝乳酶。 骆驼凝乳酶比牛凝乳酶具有更优良的凝乳特性, 它的凝乳活性比牛凝乳酶高70%,而非特 异蛋白质水解活性只有牛凝乳酶的20%,用其制备的干酪风味好,苦味少。在热稳定性方面,骆驼凝乳酶要高于牛凝乳酶。牛凝乳酶对骆驼乳无凝乳活性,而骆驼凝乳酶对骆驼乳有特异凝乳活性,因此骆驼凝乳酶更适合用于契达奶酪的制作。

骆驼凝乳酶作为牛凝乳酶理想的替代品有着潜在应用前景, 然而大量屠宰骆驼获得凝乳酶显然是不可取的。利用基因工程技术生产重组cPC是解决凝乳酶需求量增加与来源受限的有效途径, 但利用该技术生产重组 cPC 时,发酵上清液需进行预酸化激活才能得到有活性的凝乳酶 ,这在工业上增加了操作步骤,对后期酶的纯化不利,同时也增加了工业化生产成本。 因此构建能够直接分泌有活性的重组凝乳酶工程菌株,是利用基因工程技术生产重组凝乳酶需要改进和完善的研究方向。(驼可汗招商加盟)

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