重组单峰驼α-干扰素的抗病毒活性

浏览:    时间:2020-08-14 17:36

摘要:脊椎动物的干扰素(IFNs)是宿主抵抗入侵病原体免疫应答的主要防线。根据氨基酸序列、染色体位置和用于信号传递的特定受体,这些螺旋蛋白被分为I型(病毒干扰素)、II型(免疫干

脊椎动物的干扰素(IFNs)是宿主抵抗入侵病原体免疫应答的主要防线。根据氨基酸序列、染色体位置和用于信号传递的特定受体,这些螺旋蛋白被分为I型(病毒干扰素)、II型(免疫干扰素或干扰素-γ)和III型(干扰素-λ)干扰素。I型干扰素是宿主对病毒性病原体免疫应答的道防线,包括IFN-α、IFN-β、IFN-ω、IFN-ε、IFN-κ、IFN-τ和IFN-δ。骆驼类是一类独特的哺乳动物,具有独特的免疫学特性,其中重要的是单链抗体。

(驼可汗内蒙古骆驼奶招商加盟代理) 单峰骆驼被认为是一种耐寒的物种,但它仍然对许多病毒、细菌和原生动物病原体很敏感。据报道,骆驼是一种主要人畜共患疾病——中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)的宿主,也是人类感染的直接来源。I型干扰素在宿主对MERS-CoV的反应中发挥重要作用。MERS-CoV与人类抗原呈递细胞(APCs)和树突状细胞的相互作用显著诱导了I型和III型干扰素的表达,特别是IFN-α的表达。为了阐明IFN-α在一些主要的人畜共患病病毒感染中的作用,有必要从骆驼身上分离和鉴定这些关键的免疫基因。

(驼可汗内蒙古骆驼奶招商加盟代理) 试验从骆驼身上鉴定并克隆了11个IFNA亚型。重组骆驼IFN-α1蛋白在体外诱导了IFN刺激基因(ISGs)的mRNA表达,并赋予骆驼肾细胞对水痘病毒感染的抗病性。 试验用感染骆驼的一种常见的传染性正氧病毒-骆驼痘病毒(CMLV)来评价重组骆驼IFN-α1的抗病毒活性。重组原核表达的骆驼IFN-α1的预处理使体外骆驼肾细胞对CMLV的细胞病变产生抵抗。抗病毒活性的初步评估是通过观察IFN-α1处理细胞中CMLV减少的细胞病变效应进行的(图1)。

(驼可汗内蒙古骆驼奶招商加盟代理) IFN-α体外预处理的抗病毒效果可以通过定量实时PCR估计来证实,其方法是显示CMLV病毒载量的减少,并通过测量细胞存活率。在筛选出的克隆中,IFN-α亚型颇为丰富,其蛋白序列与在一些骆驼全基因组克隆中发现的潜在IFN-a基因相同,因此我们选择CdIFN-α1进行初步的重组表达和生物活性检测。比较所有骆驼IFN-α亚型对不同骆驼病毒的抗病毒活性是有意义的。 图1:用重组IFN-α1或His6标记的对照蛋白或培养基对骆驼肾细胞进行4小时的预处理,然后用骆驼痘病毒(MOI=0.1)感染细胞1小时,将新鲜培养基加入细胞中,继续生长24小时,使用显微镜观察细胞并拍摄图像。 据报道,CMLV编码一些抵制IFN-γ、TNF-α和趋化因子的蛋白。CMS-252是一种类似于CMLV分泌的VACV B19R的蛋白,据报道它与IFN-α结合,具有较低的抵制作用。因此,重组骆驼IFN-α蛋白不仅有助于了解宿主/病毒的免疫/反免疫策略,而且有助于开发潜在的CMLV生物抗病毒药物。

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